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離心機(jī)五種常用轉(zhuǎn)子體的特點(diǎn)

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    轉(zhuǎn)子是離心機(jī)用于分離試樣的核心部件,轉(zhuǎn)子規(guī)格、品種的多少是衡量離心機(jī)生產(chǎn)技術(shù)掌握程度的重要標(biāo)志,轉(zhuǎn)子一般可分為下列五大類:

    固定角轉(zhuǎn)子(Eixed-Angle-Rotor):

    主要用于分離沉降速度有明顯差異的顆粒樣品。顆粒在扇形溶地移動(dòng)的距離很短,碰到外壁的顆粒沿著管壁滑到管底,形成沉淀,因此這種轉(zhuǎn)子能很快地收集沉淀物。分離過程中,由于管壁的作用,在離心管內(nèi)將會(huì)引起強(qiáng)烈的對(duì)流,對(duì)具有相同沉降速率的顆粒會(huì)產(chǎn)生不良影響。

    水平轉(zhuǎn)子(Siwing-Bucket-Rotor):

    主要用于樣品作密度梯度離心。顆粒移動(dòng)距離長,溶液中的組分相對(duì)于管壁的位置在離心過程中和離心后不發(fā)生改變,因此離心效果好,但因顆粒在離心場(chǎng)中是從旋轉(zhuǎn)中沿徑向散離出去,而不是按相互平行的路線沉降。顆粒碰到外壁沿著管壁滑到管底,因此也會(huì)產(chǎn)生對(duì)流。(但比固定角轉(zhuǎn)子小)低速時(shí)啟動(dòng)或停機(jī)時(shí)會(huì)產(chǎn)生振動(dòng),影響分離效果,甩平轉(zhuǎn)子有敞開式和封閉式兩種,一般制備容量大,轉(zhuǎn)速小于10000RPM,離心力場(chǎng)在16000xg以內(nèi)的,作成敞開式,主要用于樣品的初分離。制備容量較前者小,轉(zhuǎn)速大于10000RPM,離心力場(chǎng)在16000xg以上的,為了減少風(fēng)力的影響,一般作成封閉式,主要用于線粒體、葉綠體、細(xì)胞核等的分離和密度梯度離心。

    連續(xù)離心轉(zhuǎn)子(Continuous-Flow-Rotor):

    主要用于懸浮介質(zhì)中高速分離較小的顆粒物質(zhì),如在培養(yǎng)基中分離細(xì)胞,在運(yùn)轉(zhuǎn)過程中,懸浮樣品以一定速度從轉(zhuǎn)子體中心流入離心池,由于溶液中的組分輕重不同,在離心力場(chǎng)作用下,重粒子具有較大的慣性離心力、沉降快,當(dāng)流速增大(降低)到一定值時(shí),重粒子將留在離心池外緣底部,而介質(zhì)將從出口流出并帶走較輕的粒子,收集組分的方法是把組分沖洗出離心池或者留在轉(zhuǎn)子體內(nèi),這種轉(zhuǎn)子是利用離心淘析技術(shù)對(duì)整細(xì)胞或大的亞細(xì)胞粒子進(jìn)行分離,在無菌和低溫條件下,被分離的組分,能保持活性,回收率高等優(yōu)點(diǎn)。如果液流方向與離心力方向相反,即降低了粒子運(yùn)行速度,相當(dāng)于增長了運(yùn)行距離,從而提高了分辨能力。

    區(qū)帶轉(zhuǎn)子(Zonal-Rotor):

    主要用于大容量的密度梯度離心,當(dāng)實(shí)驗(yàn)所需制備的樣品量多,而甩平轉(zhuǎn)子因受到量的限制時(shí),采用區(qū)帶離心是較好的。主要由帶有四塊葉片的轉(zhuǎn)子體和密封系統(tǒng)組成,轉(zhuǎn)子體和四塊葉片將離心池分為四個(gè)扇形小室,阻止溶液在離心池中旋轉(zhuǎn),葉片上有徑向?qū)Ч埽芤和ㄟ^導(dǎo)管從中心流向轉(zhuǎn)子體外壁,裝樣和取樣時(shí)應(yīng)小心,裝樣一般在2500∽3000rpm運(yùn)轉(zhuǎn)中進(jìn)行,首先將梯度液中較輕的部分通過密封管道泵入轉(zhuǎn)子內(nèi),由于慣性力的存在,梯度液在轉(zhuǎn)子外壁的垂直方向形成均勻的一層,再依次將密度較高的梯度液泵入,隨著密度的增高和梯度液的不斷泵入,密度較低的梯度液被推向中心,直到轉(zhuǎn)子完全裝滿,然后通過密封組件中心輸液管把待分離的樣品(其密度與梯度液中最輕的密度部分還低)加入,接著把密度更低的溶液注入,用以取代中心附近的樣品,裝完后,移去密封組件,蓋上轉(zhuǎn)子蓋,在一定轉(zhuǎn)速離心一定時(shí)間后,轉(zhuǎn)速降至2500∽3000rpm,裝上密封組件及輸液管,通過泵入較密的液體到轉(zhuǎn)子的液體由輕至重依次擠出。

    區(qū)帶轉(zhuǎn)子避免了用離心管所引起的壁效應(yīng)(Walleffects)和干擾,提高了分辨率。

    垂直轉(zhuǎn)子(Vertical-Tube-Rotor):

    主要用于樣品在短時(shí)間作密度梯度離心。甩平轉(zhuǎn)子分離粒子位移距離長,分辨能力高,分離后組分的區(qū)帶較寬,便于回收,但所需時(shí)間長,垂直轉(zhuǎn)子分離的粒子位移距離等于離心管直徑。轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)動(dòng)前,管內(nèi)密度梯度溶液的密度是沿重力方向變化,轉(zhuǎn)動(dòng)后,溶液的密度逐漸改變?yōu)殡x心力方向(水平方向)變化,離心結(jié)束后,溶液的密度變化方向因重力作用又沿鉛垂方向變化,形成鉛垂方向的密度梯度,由于離心管是垂直放置,所以溶液粒子位移的距離等于離心管的直徑。離心時(shí)間短,離心后樣品組分的區(qū)帶較寬,但因離心時(shí)間短,粒子得不到充分分離,將會(huì)失去一些組分,又因區(qū)帶與梯度介質(zhì)的接觸面大,易于擴(kuò)散,停機(jī)后密度重新定向,易于混合,所以作區(qū)帶離心的效果,垂直轉(zhuǎn)子不于甩平轉(zhuǎn)子。

    離心機(jī)轉(zhuǎn)子的轉(zhuǎn)速跟轉(zhuǎn)子的材料和強(qiáng)度有關(guān),一般采用強(qiáng)度好、重量輕的超硬鋁合金(LC4),超速離心機(jī)采用鈦合金(TiC4)。一般來說,對(duì)同一離心機(jī)重量輕、容量小的轉(zhuǎn)子轉(zhuǎn)速要高,反之轉(zhuǎn)速要低。轉(zhuǎn)子的保養(yǎng)及壽命管理在以后的章節(jié)中介紹。

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