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離心機的重要性從實驗中體現(xiàn)

發(fā)布時間:2021-8-13 12:1:46??????點擊:

  離心機可以讓你實現(xiàn)一種簡易快速提取細菌(含革蘭氏陽性和革蘭氏陰性細菌)和酵母染色體DNA的方法。

  實驗中,效率是關(guān)鍵,比如快速獲取微生物基因組DNA在基因克隆、重組子的篩選以及分類學(xué)中十分必需。

  接下來介紹一種采用本法所提染色體DNA,可直接應(yīng)用于常規(guī)的分子生物學(xué)實驗,包括PCR、限制性內(nèi)切酶的切割,以及基因組文庫的構(gòu)建。其中,有個關(guān)鍵性實驗設(shè)備——離心機,少了它可不行。

  1、 取1ml過夜培養(yǎng)菌液于8000g,離心機離心2min。去除培養(yǎng)基后,用400ul STE緩沖液(100mM NaCl,10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)重懸菌體,按相同條件離心清洗菌體兩次。

  2、 收集的菌體用200ul TE緩沖液(10mM Tris/HCl,1mM EDTA,pH8.0)懸起后加約50mg 直徑425-600um 規(guī)格的玻璃珠,再加入100ul Tirs飽和苯酚。

  3、 上述混合液在漩渦振蕩器上振蕩(細菌,振蕩60s;酵母,振蕩120s-200s),隨后于4℃,13000g,離心5min。

  4、 吸取上層水相(約160ul)轉(zhuǎn)移至一個新的離心管中,加TE緩沖液補至200ul,再加入100ul氯仿混勻后,于4℃,13000g,離心5min。重復(fù)此步兩到三次。

  5、 轉(zhuǎn)移上層水相(約160ul)至一個新的離心管中,補加40ul TE和5ul RNase(10mg/ml),37℃消化10min。

  6、 加入100ul 氯仿混勻于4℃,13000g,離心機離心5min。

  7、 轉(zhuǎn)移上層水相(約150ul)至一個新的離心管中。

  8、 至此,上層水相即含有純化好的基因組DNA,可直接用于隨后的常規(guī)分子生物學(xué)實驗。

  以上就是簡單的實驗講解,如果您想多多交流,可以前來我司參觀,我司生產(chǎn)供應(yīng)多種離心機,還能提供定制。


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